說(shuō)明：

介紹

用于RT-PCR的*鏈合成系統(tǒng)進(jìn)行了優(yōu)化以合成*鏈cDNA，從純化的poly（A）+或總RNA。這個(gè)系統(tǒng)可以檢測(cè)RNA的目標(biāo)從100個(gè)基點(diǎn)，至12 KB。的起始材料的量，可以改變從1微克到5微克的總RNA。逆轉(zhuǎn)錄酶是一個(gè)版本的M-MLV逆轉(zhuǎn)錄，已設(shè)計(jì)，以減少RNase H活性，并提供增強(qiáng)的熱穩(wěn)定性。使用酶cDNA的合成在42-55℃下的溫度范圍內(nèi)，提供更高的特異性，高產(chǎn)量的cDNA，和更完整長(zhǎng)度的產(chǎn)品比其他的逆轉(zhuǎn)錄酶。用于RT由于合成系統(tǒng)還沒(méi)有顯著地抑制核糖體和轉(zhuǎn)移RNA，它可用于從總RNA制備*鏈cDNA的合成。

在*步驟中，使用總RNA或聚（A）+選擇的引物用寡聚（dT），隨機(jī)引物，或一個(gè)基因特異性引物的RNA進(jìn)行cDNA合成。在第二步驟中，在一個(gè)單獨(dú)的管，使用感興趣的基因的特異性引物進(jìn)行PCR。

儲(chǔ)存及穩(wěn)定性

1年，儲(chǔ)存于-20℃下儲(chǔ)存在-20℃下，用于RT-PCR的*鏈合成系統(tǒng)是穩(wěn)定的