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自上世紀(jì)50年代起，透析就已經(jīng)成為生命科學(xué)實驗室分離生物大分子復(fù)合物的常用技術(shù)，雖然在很長一段時間內(nèi)，由于超濾及離心技術(shù)的推廣，透析技術(shù)并沒有得到很大的改進(jìn)，特別是傳統(tǒng)透析方式由于操作繁瑣，耗時等原因，會有不小的困擾。但現(xiàn)在，spectrumlabs推出了新一代即用型生物技術(shù)級透析裝置，使透析這項傳統(tǒng)的基礎(chǔ)實驗技術(shù)，在使用的簡便性和實用性方面得到了長足的進(jìn)步。
 

透析是根據(jù)半透膜對大、小分子不同尺寸的選擇性擴散過程，實現(xiàn)分離的技術(shù)。常見的蛋白質(zhì)或核酸樣品中，常會含有不需要的小分子物質(zhì)，如緩沖鹽溶液（Tris、PBS）、還原劑（二硫蘇糖醇DTT、β-巰基乙醇BME）或保存劑（醫(yī)用酒精、抗菌劑）等。

將樣品置于透析膜內(nèi)，透析液置于透析膜外（一般為樣品體積的200-300倍），使膜兩側(cè)形成濃度梯度，分子會從膜一側(cè)擴散通過膜進(jìn)入另一側(cè)，并zui終達(dá)到平衡。一旦達(dá)到平衡，透析（擴散）停止。通常情況下，接近平衡狀態(tài)時，擴散速率會降低，所以每隔一段時間需要更換透析液，以維持濃度梯度，驅(qū)動透析過程進(jìn)行。

膜的選擇是透析成功的關(guān)鍵。半透膜的孔徑需足夠大，以使小分子物質(zhì)通過，但同時又需足夠“小”，以限制大分子物質(zhì)。理想的透析膜需很“薄”、具有大小均一的膜孔、且不結(jié)合蛋白質(zhì)或核酸。常見的再生纖維素或纖維素酯即是較為理想的透析膜材質(zhì)選擇。

另一個影響透析膜選擇的重要參數(shù)是截留分子量（MWCO），我們將其定義為膜截留率至少為90%的分子的分子量。但在實際操作中，分子通過膜的擴散過程還受到分子形狀、水合程度、離子電荷及極性等因素的影響，所以需做綜合測試及評估。

樣品和透析液的體積也是需要考慮的重要參數(shù)，理想的情況是較小的樣品體積使用較大的透析液體積，以使?jié)舛忍荻葄ui大化。需要考慮樣品體積是因為透析后樣品的處理或應(yīng)用通常具有一定的zui小體積要求。但是只要能滿足zui小體積要求，一般不推薦透析過多的樣品。因為基于給定樣品的膜表面積，小體積樣品的透析速率比大體積樣品要快得多。此外，樣品與固相界面接觸的時間越長，樣品損失的可能性越高，蛋白質(zhì)或核酸發(fā)生非特異性結(jié)合或變性的幾率越大。

其它問題關(guān)注
 

1）   膜的留分子量（MWCO）到底有多？

 MWCO可以作為衡量膜截留性能的指標(biāo)，但MWCO并不是的、的數(shù)值，所以選擇膜MWCO時，建議根據(jù)需要截留的大分子物質(zhì)和需要擴散去除的小分子物質(zhì)，對不同MWCO的膜進(jìn)行測試，一般推薦膜MWCO為需截留物質(zhì)分子量的50-80%，同時需至少為需去除物質(zhì)分子量的100倍。

早期的透析膜產(chǎn)品因為生產(chǎn)技術(shù)及質(zhì)控的原因，MWCO一般控制在2kD-20kD以內(nèi)，經(jīng)過技術(shù)革新，現(xiàn)在我們可提供截留分子量范圍更廣的透析膜產(chǎn)品，低至0.1kD，高可達(dá)1,000kD。每種規(guī)格的透析膜均具有特定的截留性能，可使用已知分子量的物質(zhì)對MWCO進(jìn)行檢測。

2）  透析時一定要攪拌嗎？
 

攪拌可顯著縮短透析時間。所有的膜都具有內(nèi)表面和外表面，從膜的樣品一側(cè)到透析液一側(cè)并沒有固定直徑的通道，相反，樣品中的小分子量物質(zhì)擴散進(jìn)入內(nèi)表面的膜孔，然后通過膜內(nèi)部，再從膜外表面的膜孔透出，進(jìn)入膜外擴散層“微環(huán)境”，擴散層內(nèi)小分子物質(zhì)的濃度顯著高于透析液的其它位置。攪拌可快速、有效地打破擴散層微環(huán)境，維持濃度梯度，保證透析進(jìn)行。

3）  透析溫度應(yīng)如何把握？
 

溫度對透析的進(jìn)行也有一定程度地影響，因為分子在較高的溫度下會更快地移動擴散，但前提是操作溫度不影響產(chǎn)品的活性。所以，除特殊樣品外，一般在環(huán)境溫度或室溫下進(jìn)行即可。

4）  怎樣判定透析已經(jīng)結(jié)束？
 

判定透析結(jié)束并沒有簡單、的標(biāo)準(zhǔn)。一般來說，只要樣品中的小分子含量降低到不影響后續(xù)實驗即可認(rèn)為透析完成。

5）  需要對膜進(jìn)行預(yù)處理嗎？
 

spectrumlabs透析膜出廠前已經(jīng)預(yù)處理。部分規(guī)格的膜產(chǎn)品可能含有少量的甘油或硫化物，正常情況下，這些小分子在透析過程中即可自動擴散去除。如處理的樣品較為敏感，也可在使用前用超純水對膜進(jìn)行預(yù)沖洗，對于在膜生產(chǎn)過程中可能存在的痕量重金屬，可使用重金屬漂洗液去除。

Spectra/Por Float-A-Lyzer G2即用型透析裝置（CE膜）采用預(yù)制型膜管，極大地提高了樣品/膜比表面積，可顯著縮短分子的遷移距離，使透析速率更快。同時Spectra/Por Micro Float-A-Lyzer微量即用型透析裝置可處理低至100μl的樣品，如使用較大量的透析液，維持高濃度梯度，即可得到*的透析速率。